50T 牛赤羽病毒RT-LAMP检测试剂盒

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

储存条件：
14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

P物质(SP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Substance P (SP) 96T Rattus norvegicus (Rat)
组织因子通道抑制因子(TFPI)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Tissue Factor Pathway Inhibitor (TFPI) 96T Homo sapiens (Human)
组织因子通道抑制因子(TFPI)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Tissue Factor Pathway Inhibitor (TFPI) 96T Mus musculus (Mouse)
脱氢表雄酮(DHEA)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Dehydroepiandrosterone (DHEA) 96T General
视黄醇结合蛋白1(RBP1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Retinol Binding Protein 1, Cellular (RBP1) 96T Homo sapiens (Human)
神经激肽A(NKA)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Neurokinin A (NKA) 96T Homo sapiens (Human)
血小板衍生生长因子AB(PDGFAB)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Platelet Derived Growth Factor AB (PDGFAB) 96T Homo sapiens (Human)
C-肽(C-Peptide)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for C-Peptide 96T Homo sapiens (Human)
C-肽(C-Peptide)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for C-Peptide 96T Mus musculus (Mouse)
C-肽(C-Peptide)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for C-Peptide 96T Rattus norvegicus (Rat)
胰岛素(INS)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Insulin (INS) 96T Canis familiaris; Canine (Dog)
胰岛素(INS)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Insulin (INS) 96T Chicken (Gallus)
胰岛素(INS)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Insulin (INS) 96T Homo sapiens (Human)
甲状腺素(T4)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Thyroxine (T4) 96T General
三碘甲状腺原氨酸(T3)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Triiodothyronine (T3) 96T General
雌三醇(E3)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Estriol (E3) 96T General
睾酮(Testosterone)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Testosterone 96T General
孕酮(Pg)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Progesterone (Pg) 96T General
雌二醇(E2)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Estradiol (E2) 96T General
皮质醇(Cortisol)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Cortisol 96T General
心肌肌钙蛋白I(TNNI3)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Troponin I Type 3, Cardiac (TNNI3) 96T Homo sapiens (Human)
肌红蛋白(MYO)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Myoglobin (MYO) 96T Homo sapiens (Human)
肌红蛋白(MYO)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Myoglobin (MYO) 96T Mus musculus (Mouse)
肌红蛋白(MYO)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Myoglobin (MYO) 96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
肌红蛋白(MYO)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Myoglobin (MYO) 96T Rattus norvegicus (Rat)
内皮素1(EDN1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Endothelin 1 (EDN1) 96T Homo sapiens (Human)
内皮素1(EDN1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Endothelin 1 (EDN1) 96T Mus musculus (Mouse)
内皮素1(EDN1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Endothelin 1 (EDN1) 96T Rattus norvegicus (Rat)
氨基端前脑钠素(NT-ProBNP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for N-Terminal Pro Brain Natriuretic Peptide (NT-ProBNP) 96T Homo sapiens (Human)
铁蛋白(FE)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Ferritin (FE) 96T Equus caballus; Equine (Horse)
铁蛋白(FE)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Ferritin (FE) 96T Homo sapiens (Human)
载脂蛋白A1(APOA1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Apolipoprotein A1 (APOA1) 96T Homo sapiens (Human)
组织因子(TF)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Tissue Factor (TF) 96T Homo sapiens (Human)
组织因子(TF)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Tissue Factor (TF) 96T Mus musculus (Mouse)
纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI1) 96T Homo sapiens (Human)
髓鞘碱性蛋白(MBP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Myelin Basic Protein (MBP) 96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
髓鞘碱性蛋白(MBP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Myelin Basic Protein (MBP) 96T Homo sapiens (Human)

HSC 人雪旺细胞 5 x 10^5 cells/vial
HPC 人神经束膜细胞 5 x 10^5 cells/vial
HDMEC 人真皮微血管内皮细胞-成人 5 x 10^5 cells/vial
HDLEC 人真皮淋巴内皮细胞 5 x 10^5 cells/vial
HDMEC-a 人真皮微血管内皮细胞-成人 5 x 10^5 cells/vial
HDVSMC 人真皮血管平滑肌细胞 5 x 10^5 cells/vial
HEK-n 人表皮角质细胞-新生 5 x 10^5 cells/vial
HEK-a 人表皮角质细胞-成人 5 x 10^5 cells/vial
HEK-f 人表皮角质细胞-胎儿 5 x 10^5 cells/vial
HEM-l 人表皮黑色素细胞-浅色素 5 x 10^5 cells/vial
HEM-m 人表皮黑色素细胞-中色素 5 x 10^5 cells/vial
HEM-d 人表皮黑色素细胞-深色素 5 x 10^5 cells/vial
HEM-a 人表皮黑色素细胞-成人 5 x 10^5 cells/vial
牛赤羽病毒RT-LAMP检测试剂盒HEM-f 人表皮黑色素细胞-胎儿 5 x 10^5 cells/vial
HDF-f 人真皮成纤维母细胞-胎儿 5 x 10^5 cells/vial
HDF-n 人真皮成纤维母细胞-新生 5 x 10^5 cells/vial
HDF-a 人真皮成纤维母细胞-成人 5 x 10^5 cells/vial
HHDPC 人毛乳头细胞 5 x 10^5 cells/vial
HHGMC 人生发基质细胞 5 x 10^5 cells/vial
HHORSC 人毛囊外根鞘细胞 5 x 10^5 cells/vial
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。