大鼠α干扰素（IFN-α）ELISA试剂盒

产品名称：大鼠α干扰素（IFN-α）ELISA试剂盒

 

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠α干扰素（IFN-α）水平。用纯化的大鼠α干扰素（IFN-α）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入大鼠α干扰素（IFN-α），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠α干扰素（IFN-α）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠α干扰素（IFN-α）含量。

 

 

注：标准品浓度依次为：40、20、10、5、2.5、0 pg/mL.

 

 

样本处理及要求：

1.血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收 集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7.不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

 

注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡 60 分钟。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间尽量控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，尽量做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第one孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

 

 

 

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

 

 

（此图仅供参考）

 

试剂盒名称：大鼠α干扰素（IFN-α）ELISA试剂盒

 

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。

2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。

 

检测范围：

1.25 pg/mL – 40 pg/mL

 

灵敏度：

最di检测浓度小于 0.1 pg/mL

 

保存条件及有效期： 

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月

 

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