电转仪celetrix

Description

细胞电转染(电转),也叫细胞电穿孔(electroporation), 是把外源大分子物质DNA、 RNA、 siRNA、 蛋白质以及一些小分子等导入细胞膜内部的重要方法。

在瞬间强大电场的作用下,溶液中细胞的细胞膜具有了一定的通透性,带电的外源物质以类似电泳的方式进入细胞膜。 由于细胞膜磷脂双分子层的电阻很大,细胞外部电流场产生的细胞两极电压都被细胞膜承受,细胞质内分到的电压可以忽略不计,细胞质内部几乎没有电流,因此也决定了正常范围内的电转过程中细胞毒性很小。 电场使DNA等物质进入细胞膜后只能停止在细胞膜附近,随后细胞本身的机制可以允许这些物质到细胞核等处。

普通电转能量过高可导致部分细胞因膜破坏而死亡,其中能存活下来的细胞内部都不会受到电流影响,因为细胞膜完整是细胞存活的必要条件。

由千电转技术依靠的是物理方法,细胞表面的分子特性对电转影响比较小。 相比化学转染方法和病毒载体转染方法,电转可以用在所有的细 胞种类上,而且容易定量控制。

 

 

Celetrix™ 电转仪以及相关的电击管与电转液综合优化了仪器电学特性、 电击管内的电场均匀度以及电转液的细胞保护作用,是获得高效、 低毒性细胞电转的解决方案。

 

应用:

•     有效的细胞:几乎所有的真核细胞,包括所有细胞系,原代细胞,干细胞,血液和免疫类细胞,神经细胞,植物细胞和胚胎。

•     可以电转的物质包括DNA、 RNA、 siRNA、 蛋白质等。

•     适用实验:瞬时或稳定表达蛋白质、 基因敲除与敲入、 siRNA和其他分子机制研究。

•     科研领域:细胞分子生物学、 免疫学、 血液学、 神经学、 癌症研究、 新药开发等。

 

功能强大   操作简单

 效率高        细胞死亡率低

适用所有真核细胞;可以电转DNA、RNA、siRNA、蛋白质等;
 外观美观、界面简洁、操作简单。
 电脉冲参数设定方便,内部电路反应迅速,设定完成即可启动,瞬间完成电转。
 示波器功能,显示实际通过样品的电流波形,可视化掌控实验质量。
 LED照明灯,清楚指示电击管连接状态。
 功率强大,单次高效电转可达1000ul,可以经济快速的电转大量细胞。

 

全部过程只需5
1、悬浮细胞(贴壁细胞先消化成单细胞状态)1000rpm离心3min
2、无血清细胞培养液洗一遍、1000rpm离心1min
3、重悬细胞在电转液中,加入DNA,将细胞转移至电击管盖好并放入仪器中。
4、设定参数进行电击,大部分细胞系可以使用30ms单脉冲,只需改变一个电压参数。
5、取出细胞进行培养。

技术参数

仪器型号

LE

EX

体积使用范围

20ul~200ul

20ul~1000ul

常用细胞量

20ul

0.2×106~2×106

0.2×106~2×106

120ul

1.2×106~1.2×107

1.2×106~1.2×107

200ul

2×106~2×107

2×106~2×107

600ul

 

6×106~6×107

1000ul

 

1×107~1×108

电转脉冲电压

300V-1500V

300V-1500V

 

 

应用的优势:

Celetrix新一代电转可以高效转染从新鲜PBMC到刺激培养阶段的T细胞。 与其他电转技术相比, Celetrix电转技术具有效率。

我们的技术也具有细胞存活率,并且细胞在电转后能够和未电转细胞

Celetrix电转仪使得CAR-T, TCR-T制备、 CRISPR介导的基因编辑等变得容易。

 

目前70%以上的治疗性抗体蛋白都是由CHO细胞产生

的,Celetrix电转技术对CHO细胞可以达到高效稳定

(90%以上)的电转效率和80%以上的存活率, 为治疗 性抗体细胞转染领域提供了更加高效、便捷、 稳定的转 染方法。

 

利用Celetrix的电转技术电转Cas9蛋白和gRNA (+)或者Cas9蛋白,通过T7El核酸内切酶检测基因编辑效率,在APP, AAVSl, OCT4和PDCDl四个基因位点的编辑效率均超过50%, 其中AAVSl基因位点编辑效率能够达到70%。

 

•     电极杯中样品与电极接触面积大,电化学反应产生毒性物质多,并且产生非常多的气泡。 气泡对电转的实际影响非常大。

•     由千气泡是绝缘体,电流只能从气泡之间的间隙溶液流过,这样导致气泡间隙的溶液中电流富集升高,处千其中的细胞因承受太高的电压而死亡。

电极杯内的溶液上方受到液面效应影响,电场不均匀。 靠近两个电极1-2mm的区域由千气泡的作用,电场也不均匀。电极杯内电场比较均匀的较优电转区域很小(右图蓝色部分),而1mm或者

2mm的电极杯甚至可能没有较优电转 区域。

液体样品密封呈规整圆柱形,没有液面效应影响电场均匀度。

 电极与液体接触面积小,气泡少又而且被压缩,不影响电流分配。

电击管内部电场均匀,全部都是有效电转 区域。